一、rRNA去除的必要性
在RNA測(cè)序(RNA-Seq)中,通常需要先去除rRNA。這是因?yàn)榭俁NA中80%以上都是rRNA,而rRNA提供的轉(zhuǎn)錄本信息非常少,且測(cè)序時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量無(wú)用的rRNA序列數(shù)據(jù),浪費(fèi)寶貴的測(cè)序資源。因此去除rRNA可以提高測(cè)序效率和數(shù)據(jù)質(zhì)量。
二、rRNA去除探針的原理
1、特異性DNA探針雜交與RNase H消化
- 使用特異性的DNA探針與rRNA雜交,形成DNA-RNA雜交鏈。RNase H能夠特異性地消化DNA-RNA雜交鏈中的RNA單鏈,而未與探針雜交的mRNA、lncRNA等不受影響,從而富集目標(biāo)RNA。
2、探針雜交捕獲與磁珠吸附
- 通過(guò)DNA探針或RNA探針雜交捕獲rRNA,然后利用鏈霉親和素磁珠吸附去除rRNA。這種方法稱為Ribo-Zero-seq。

三、rRNA去除探針的應(yīng)用
1、物種特異性
- rRNA去除探針需要根據(jù)研究物種的rRNA序列設(shè)計(jì)特異性的雜交探針。
2、不同RNA類型
- 除了去除細(xì)胞質(zhì)中的rRNA,一些試劑盒還可以去除線粒體中的rRNA。
3、樣本類型
- rRNA去除探針適用于多種樣本類型,包括新鮮樣本、降解樣本、FFPE(甲醛固定石蠟包埋)樣本等。
四、rRNA去除探針的優(yōu)勢(shì)
1、高效去除
- rRNA去除探針可以高效去除rRNA,提高目標(biāo)RNA的富集效率。
2、特異性高
- 探針設(shè)計(jì)具有高度特異性,能夠準(zhǔn)確識(shí)別并去除rRNA,而不影響其他目標(biāo)RNA。
3、適用范圍廣
- 適用于多種物種和樣本類型,能夠滿足不同研究需求。
通過(guò)使用rRNA去除探針,可以顯著提高RNA測(cè)序的效率和數(shù)據(jù)質(zhì)量,為轉(zhuǎn)錄組研究提供更準(zhǔn)確的信息。